南宁市家犬钩端螺旋体病的调查及病原分离和菌型鉴定
　　中国人兽共患病杂志 1999年第2期5卷 调查与防制
　　作者：曾铭珠　徐丽华
　　单位：广西兽医研究所（南宁　530001）
　　犬属动物是钩端螺旋体的易感动物。在人、畜钩端螺旋体病的流行病学方面，有着重要的意义。家犬与人、畜相处密切，在一个特定的地区内，查清家犬对钩端螺旋体的感染程度和带菌状况，对诊断和防制人、畜钩端螺旋体病方面，有着很大的帮助。为此，我们在南宁市某个体宰杀家犬的屠场，进行了病犬的临床症状和组织器官的病理变化观察，并取血作钩端螺旋体病的血清学试验，取肾作钩端螺旋体的纯菌分离和菌型鉴定，结果报告如下。
　　1　材料与方法
　　1．1　试验材料
　　1．1．1　调查家犬的来源　南宁市黄××和肖××等狗肉贩子，从南宁市近郊的农村饲养的家犬（本地土种，自由放养）收购，转运到市内某地圈养（体重约8―15kg），陆续的不定期宰杀后出售。
　　1．1．2　血清和脏器的采集　待杀狗放血时，用15mm×120mm的试管盛血5～7ml，放成斜面，置冰箱中，释出血清后，倒至链霉素瓶内，存於4℃下备用。待开肚后，取肾放於消毒的铝制饭盒内，存冰箱备用。
　　1．1．3　培养基　本实验自配的柯索夫培养基盐类基础液，所用化学药品，均为AR和CP产品。兔血清系本所动物饲养室饲养的1．5―2kg的健康家兔，心脏取血，分离血清，存於冰箱备用。
　　1．1．4　抗原　本实验室传代的国内常用的13群15型钩端螺旋体活培养物。
　　1．1．5　抗血清　购自中国药品生物制品检定所，13群15型抗血清。
　　1．1．6　稀释液　自配的PBS，高压灭菌后，存於室温。
　　1．2　试验方法
　　1．2．1　临床症状和解剖病变的观察　结合犬群饲喂时，逐个观察其精神，食欲、体温、大小便及结膜等的变化情况。
　　宰杀后，犬尸开肚时，检查各腔器的病理变化，并记录之。
　　1．2．2　病犬血清检查　钩端螺旋体显微凝集试验：抗原系用如下的常见血清型：出血黄疸型（L．icterohemorrhagia）、波摩舒型（L．pomona），犬型（L．canicola），秋季热型（L．autumnlis），流感伤寒型（L．grippolyphosa），澳洲型（L．australis），尿型（L.hyos）等7个菌型的菌株活培养物。
　　待检血清稀释从1∶50开始倍比稀释至1∶1600，同时设立对照。
　　试验：取各个稀释度的血清稀释液，分别放入7排康氏试管内，每管0．1ml，然后加入活菌抗原（检定合格的）0．1ml，摇匀，37℃下作用120分钟，取出涂片，用暗视野显微镜观察，凡半数以上菌体凝集成团者，即为阳性（）。
　　1.2．3　钩端螺旋体的分离培养及其鉴定　取病犬肾，以无菌操作法，截其皮质一小块（似米粒大），投于柯索夫培养基内，放28～30℃下培养：至10、20、30、45天，分别涂片，暗视野显微镜检查，若发现有钩端螺旋体，立即转接于新鲜的KorThof培养基内，使其继续稳定地生长。若发现有钩端螺旋体，同时又被什菌污染时，可用生物滤过法处理，获得纯培养。钩端螺旋体菌型鉴定，按常规进行。
　　2　结果
　　2．1　病犬的临床表现　共检查301只家犬，其中131只表现消瘦、萎靡，结膜潮红，羞明、流泪，被毛松乱，食量少，有的呕吐，拉稀便，尿黄。体温超过40℃72只。宰杀后检查124只，其中脾、肾、心、胃、肠充血出血的69只。
　　2．2　检查病犬血清301份，其中Pomona型阳性的17份占5．6％；Canicola型阳性的18份，占5．9％；Icterohemorrhagiae型阳性的2份，占0．66％；Grippolyphosa型阳性的2份，占0．66％；Autumnalis型阳性的2份，占0．66％；同一个血清，与Canicola和Pomona阳性的3份，占1％。
　　2．3　采集犬肾标本301份，进行分离培养，结果184份肾样本接种物污染杂菌，实际有效培养数为117份。其中3份肾样本培养出钩端螺旋体。
　　2．4　病犬肾样本中，分离到3株钩端螺旋体经鉴定为L．canicola。
　　3　讨论
　　文献报道和我们的试验结果表明，有的家犬感染钩端螺旋体后，症状典型，有的感染后，症状轻微或不表显症状而成为隐性带菌者，因此这一类型的患犬，对人、畜钩端螺旋体病的发生和传染，危险性更大。
　　检查301只家犬，有症状表现的131只占43．5％；组织器官有病变的69只，占22．9％，但血检总阳性率为14．6％，出菌率为2．6％，从而表明，还有病犬是其他疾病引起的，提示：家犬不但是人、富钩端螺旋体病的传染来源之一，而且也是其疾病的传染来源之一。
　　血清检验结果表明，调查的家犬感染　L．Pomona的5．6％；L．canicolo占5．9％；autumnalis占0．66％；L.ieterohemorrhagine占0．66％；L．grippotyphoso占0．66％；同一血清与L．pomona和L．canicola阳性的占1％，从这结果表明，南宁市家犬钩端螺旋体病原是复杂的。
　　据文献报道，家畜钩端螺旋病表现为衰竭、高热、厌食、肾炎、肠炎和出血性素质的病理变化，我们此次在病犬中观察到的情况与文献报道是相似的。另家犬钩端螺旋体病，主要是L．Canicola引起，部份是Icterohemorrhagiae引起，也有报道Pomona型可引起。我们此次在病犬中分离的3株，经鉴定为L．canicola，这与文献报导是一致的。
　　4　参考文献
　　1．Alston J M，and Broom J C．Leptospirsis in men and animal．Chapter XVI，1958．
　　2．侯崇昌等．广东钩端螺旋体病动物宿主进一步调查．中华医学杂志，1958，43，603．
　　3．邓沛霖等．猪钩端螺旋体病的初步调查．广西兽医研究所内部资料 1986．12．
　　4．曾铬珠等．幼犬感染致病性钩端螺旋体试验．广西兽医研究所内部资料．1986．12
　　本文得到李秉鸿老师帮助，致谢）